人Dickkopf相关蛋白1（DKK1）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：1μg/L -40μg/L

使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 Dickkopf 相关蛋白 1（DKK1）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 Dickkopf 相关蛋白 1（DKK1）水平。用纯化 的人 Dickkopf 相关蛋白 1（DKK1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中 依次加入 Dickkopf 相关蛋白 1（DKK1），再与 HRP 标记的 Dickkopf 相关蛋白 1（DKK1） 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 Dickkopf 相关蛋白 1（DKK1）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值）， 通过标准曲线计算样品中人 Dickkopf 相关蛋白 1（DKK1）浓度。

试剂盒组成

标本要求

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.     标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

 2.     加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.     温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.     配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.     洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.     加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7.     温育：操作同 3。

8.     洗涤：操作同 5。

9.     显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟.

10.   终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.   测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。