环鸟苷一磷酸腺苷一磷酸(cGAMP)酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

 本试剂盒仅供研究使用。 

使用目的：本试剂盒用于测定样本中环鸟苷一磷酸腺苷一磷酸(cGAMP)的含量。

实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中环鸟苷一磷酸腺苷一磷酸(cGAMP)水平。用纯 化的环鸟苷一磷酸腺苷一磷酸(cGAMP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔 中加入环鸟苷一磷酸腺苷一磷酸(cGAMP)，和 HRP 标记的环鸟苷一磷酸腺苷一磷酸(cGAMP) 抗原，使它们竞争结合，，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。样本颜色的深浅和样品中的 环鸟苷一磷酸腺苷一磷酸(cGAMP)的含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度 （OD 值），通过标准曲线计算样品中环鸟苷一磷酸腺苷一磷酸(cGAMP)的含量。

试剂盒组成

标本要求

1 ．标本处理：（1）水样   采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查

（2）组织   样品用丁醇： 甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相 关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验， 可将标本放于-20℃保存，备查

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.     加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2.     加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

3.     温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。

4.     配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.     洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.     显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟.

7.     终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

8.     测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

 计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。

注意事项

1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4 ． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n ×5）。

5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6 ．底物请避光保存。

7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 ．本试剂不同批号组分不得混用。

检测范围：

35ng/L - 1400 ng/L

规格：

96 人份/盒

保存条件及有效期

1 ．试剂盒保存：； 2-8℃。

2 ．有效期：6 个月