人1型组织纤溶酶原物剂(PAIT1)elisa检测试剂盒
货号：YT-H11537
英文简称：PAIT1 elisa试剂盒
定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人1型组织纤溶酶原物剂(PAIT1)elisa检测试剂盒的浓度。
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使用试剂盒前，必须仔细阅读本说明书。
人1型组织纤溶酶原物剂(PAIT1)elisa检测试剂盒实验原理 ：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人1型组织纤溶酶原物剂(PAIT1)抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人1型组织纤溶酶原物剂(PAIT1)校准品和待测样本，再加入另一株 HRP 标记的抗人1型组织纤溶酶原物剂(PAIT1)抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固
相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，产
生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪 450nm 波长上测定吸
光度（OD 值），吸光度（OD 值）与待测样品中人1型组织纤溶酶原物剂(PAIT1)的浓
度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人1型组织纤溶酶原物剂(PAIT1)的
浓度
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品：
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作程序：
所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。设置标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，0 值孔加样本稀释液 50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本 50μL。
3、除空白孔外，标准品孔、0 值孔和样本孔，加入辣根化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL。
4、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育 60min。
5、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20S，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复 5 次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s 的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
6、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育 15min。
7、所有孔加入终止液 50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD 值）。
试剂盒限制性：
1、使用试剂盒配套的样品稀释液。
2、如果样本值高于标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。
操作注意事项：
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或小鼠体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
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