本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人磷酸化核转录因子p65(pNF-KB P65)水平。用纯化的人磷酸化核转录因子p65(pNF-KB P65)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人磷酸化核转录因子p65(pNF-KB P65)，再与HRP标记的人磷酸化核转录因子p65(pNF-KB P65)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷酸化核转录因子p65(pNF-KB P65)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人磷酸化核转录因子p65(pNF-KB P65)浓度。

标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根化物酶的（HRP）活性。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作程序：
所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。设置标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，0 值孔加样本稀释液 50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本 50μL。
3、除空白孔外，标准品孔、0 值孔和样本孔，加入辣根化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL。
4、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育 60min。
5、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20S，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复 5 次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s 的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
6、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育 15min。
7、所有孔加入终止液 50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD 值）。

产品特点
一、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；
二、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型
免责声明 1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或小鼠体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。 2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
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