本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠促肾上腺皮质释放因子受体2（CRFR2）水平。用纯化的小鼠促肾上腺皮质释放因子受体2（CRFR2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小鼠促肾上腺皮质释放因子受体2（CRFR2），再与HRP标记的小鼠促肾上腺皮质释放因子受体2（CRFR2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠促肾上腺皮质释放因子受体2（CRFR2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠促肾上腺皮质释放因子受体2（CRFR2）浓度。

标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根化物酶的（HRP）活性。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作程序：
所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。设置标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，0 值孔加样本稀释液 50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本 50μL。
3、除空白孔外，标准品孔、0 值孔和样本孔，加入辣根化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL。
4、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育 60min。
5、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20S，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复 5 次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s 的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
6、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育 15min。
7、所有孔加入终止液 50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD 值）。

试剂盒限制性：
1、使用试剂盒配套的样品稀释液。
2、如果样本值高于标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。
免责声明 1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或小鼠体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。 2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
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